Larry Daley, seorang penjaga malam baru di Museum Sejarah Alam, tak menyangka pekerjaannya akan serumit ini. Begitu matahari terbenam, patung-patung hidup, dinosaurus berkeliaran, dan Attila the Hun mengamuk. Dengan bantuan tokoh-tokoh sejarah yang kacau, Larry harus menjaga ketertiban—sambil menyelamatkan artefak ajaib dari pencuri. Mampukah si pecundang ini menjadi pahlawan bagi museum… dan putranya?