Larry Daley, mantan penjaga malam yang kini sukses, kembali ke dunia ajaib ketika artefak museum lama dipindahkan ke Smithsonian. Di sana, ia menemukan teman-temannya—termasuk Dexter, Jedediah, dan Octavius—terancam oleh firaun jahat Kahmunrah. Dibantu oleh Amelia Earhart yang pemberani, Larry memimpin pasukan sejarah dalam pertempuran epik melawan kekuatan gelap. Dengan aksi kocak dan petualangan seru, bisakah Larry menyelamatkan kawanannya sebelum fajar tiba?